本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷
牛（Bovine）膽汁酸（BA）ELISA 檢測試劑盒
使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被膽汁酸（BA）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的膽汁酸（BA）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1.
血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2.
血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。
3.
細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4.
組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘
取上清。
5.
保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1.
酶標儀（450nm）
2.
高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.
37℃恒溫箱
操作注意事項
1. 試劑盒保存在 2-8℃，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3. 濃度為 0 的 S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明
書操作時樣本已經(jīng)稀釋 5 倍，最終結(jié)果乘以 5 才是樣本實際濃度。
4.
嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5.
所有液體組分使用前充分搖勻。
注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、1、2、4、8、16μmol/L
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。
洗板方法
1.
手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次。
2. 自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
操作步驟
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。
2. 設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μ
L；
3. 樣本孔先加待測樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體 100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去
洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。
6.
每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
7.
每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測定各孔的OD 值。
結(jié)果判斷
繪制標準曲線：在 Excel 工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應(yīng)OD 值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1. 準確性：標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值，大于等于0.9900。
2.
靈敏度：最di檢測濃度小于 0.1μmol/L。
3.
特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4.
重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 15%。
5.
貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6.
有效期：6 個月
免責聲明
1.
試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。
2.
嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。
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