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炭疽桿菌(BA)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR 法)
更新時間:2020-08-11 點擊量:2107

炭疽桿菌(BA)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR )

【產(chǎn)品名稱】 將步驟 1 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,分別加入相應(yīng)的反

 

通用名稱:炭疽桿菌(BA)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR )應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

 

Name Bacillus Anthracis Detection Kit (Real-Time PCR Method) 4 擴增(核酸擴增區(qū))

【包裝規(guī)格】48T/

【預(yù)期用途】

炭疽是由炭疽桿菌(Bacillus Anthracis, BA)感染引起的一種人獸共患病。BA 在環(huán)境中形成芽孢,可長期、穩(wěn)定地存在于自然界中。由于 BA 的穩(wěn)定性及其致病性,易引發(fā)突發(fā)公共衛(wèi)生事件。目前的 BA 檢測方法主要基于病原體的培養(yǎng)、染色鏡檢、血清學(xué)檢測等,但這些方法均不適合早期的快速偵檢?;诤怂釞z測的熒光-PCR技術(shù),因其靈敏度高、操作簡單、特異性好,可快速檢測炭疽病原,及時控制炭疽疫

4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL

熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter DyeFAM, 淬滅通道(Quencher Dye

NONEABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光,選擇 None 即可。

4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:

 

情 。

[1] 本試劑盒適用于檢測皮膚水泡液、咽拭子、可疑食物等樣本中的炭疽桿菌,用于

炭疽桿菌感染的輔助診斷。

5 結(jié)果分析判定

 

【檢驗原理】

6.1 結(jié)果分析條件設(shè)定

 

本試劑對炭疽桿菌特異性基因設(shè)計引物和熒光探針[2-3],用熒光 PCR 技術(shù)對炭疽 設(shè)置 Baseline  Threshold:一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)

 

桿菌的核酸進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

 

【試劑組成】

整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline start (一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)

節(jié))、stop (一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold Value (上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結(jié)果。

 

規(guī)

 

核酸提取液酶液

BA 反應(yīng)液

BA 陽性質(zhì)控品

陰性質(zhì)控品

注:

1.5mL×2 

50μL×1 

1.0mL×1 

50μL×1 

250μL×1 

7結(jié)果判斷

陽性:檢測通道 Ct ≤35.0,丏曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。

可疑:檢測通道 Ct >35.0,丏出現(xiàn)明顯擴增曲線的樣本建議重復(fù)試驗,重復(fù)試驗結(jié)果出現(xiàn) Ct ≤35.0 和明顯擴增曲線者為陽性,否則為陰性。

陰性:樣本檢測結(jié)果無 Ct 值丏無明顯的擴增曲線。

8 檢測方法的局限性

 

1) 不同批號試劑不能混用。 Ø 樣本檢測結(jié)果不樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān);

 

2) 試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標示的檢測次數(shù)。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復(fù)凍融數(shù)不超過 5 次,有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005PLightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列

Ø  樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;

Ø  陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏,會導(dǎo)致假陽性結(jié)果;

Ø  病原體在流行過程中基因突變、重組,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

Ø  不同的提取方法存在提取效率差異,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

Ø  試劑運輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定  量檢測不準確的結(jié)果;

 

熒光定量 PCR 檢測儀。 Ø 本檢測結(jié)果僅供參考,如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

 

 

【標本采集】

皮膚炭疽,取水泡液 1mL;肺炭疽,采集咽拭子標本,放入標本采集管中;腸炭疽,取糞便 1g

【保存和運輸】

上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標本運送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

9. 質(zhì)控標準

陰性質(zhì)控品:無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示;

陽性質(zhì)控品:擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,丏 Ct ≤32;

以上條件應(yīng)同時滿足,否則實驗視為無效。

 

【注意事項】

Ø  所有操作嚴格按照說明書進行;

Ø 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,*混勻并短暫離心;

Ø  反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

 

1. . 樣品處理(樣本處理區(qū)) Ø 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

 

1.1 1 樣本前處理

固體樣本:手術(shù)剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中,8000rpm 離心 2min,取上清液 100μ

L 1.5mL 滅菌離心管中;液體樣本:直接取 100μL 1.5mL 滅菌離心管中。

1 111 提取

1) 對上述處理好的標本加入 50μL 核酸提取液,100℃恒溫處理 10min,13,000

rpm 離心 5min,取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL EP 管,-20℃保存;

2) DNA 的提取也可以采用深圳綠食源生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的 DNA 提取試劑盒

(離心柱提取法),請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

 

2. 試劑配制(試劑準備區(qū))

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 ),每測試反應(yīng)體系配制如下表:

Ø 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)與用工作服;

Ø 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行,以免交叉污染;

Ø 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

Ø  試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通  則》進行處理。

 試劑 BA 反應(yīng)液 酶液

 

用量(樣本數(shù)為 N20μL

1μL

 

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中,21uL/管。

3 加樣(樣本處理區(qū))

 

 

實驗代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費代檢測

CCK8檢測

HE染色

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化IHC染色

熒光定量PCR

動物模型服務(wù)

流式細胞檢測

免疫熒光染色

激光共聚焦

DNA甲基化實驗

石蠟/冰凍切片

透射電鏡服務(wù)

掃描電鏡實驗

蛋白雙向(2-D)

動物實驗

免疫共沉淀

原位雜交(FIsh)

蛋白質(zhì)純化

分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

組蛋白甲基化磷酸化乙酰化

 

蛋白雙向2D-WB

 

藥理毒理動物實驗

 

番紅O固綠染色

明膠酶譜MMP

酶活性檢測

動物造模/模型實驗服務(wù)

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